過(guò)氧化物酶(pod)測(cè)試方法 |
點(diǎn)擊次數(shù):2368 更新時(shí)間:2016-10-26 |
過(guò)氧化物酶(pod)測(cè)試原理: 過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)的反響,產(chǎn)品為醌類(lèi)化合物,此化合物進(jìn)一步縮合或與別的分子 縮合,發(fā)生顏色較深的化合物。本試驗(yàn)以鄰甲氧基苯酚(即愈創(chuàng)木酚)為過(guò)氧化物酶的底物,在此 酶存鄙人,H2O2可將鄰甲氧基苯酚氧化成紅棕色的4-鄰甲氧基苯酚紅棕色的物質(zhì)可用分光光度計(jì)在470nm處測(cè)定其消光值,即可求出該酶的活性。 試驗(yàn)準(zhǔn)備: 儀器:分光光度計(jì)、離心機(jī)、秒表、天平、研缽、磁力攪拌器 試劑:愈創(chuàng)木酚、30%H2O2、0.2mol/L磷酸緩沖液(7.8)、0.1mol/L磷酸緩沖溶液(PH6.0,見(jiàn)附錄) 反應(yīng)混合液[100mmol/L磷酸緩沖溶液(PH6.0)50ml,參加愈創(chuàng)木酚28μl,于磁力攪拌器上加熱攪 拌,直至愈創(chuàng)木酚溶解、待溶液冷卻后,參加(待溶液冷卻后再參加,不然導(dǎo)致分解)30%H2O2 19μl,混合均勻,保留于冰箱中。 實(shí)踐的構(gòu)成和裝備: 試劑一:液體60ml×4瓶,4℃保留6個(gè)月 試劑二:粉劑×3瓶,4℃保留6個(gè)月 試劑二使用液的裝備:臨用每瓶粉劑參加10ml的雙蒸水溶解,4℃避光保留 試劑三:液體5ml1瓶,4℃保留6個(gè)月 試劑三使用液的制造:臨用前用雙蒸水15倍稀釋?zhuān)沟?cm光徑,雙蒸水調(diào)零時(shí)A240保持在0.4擺布,現(xiàn)用現(xiàn)配。若A值太高,則加雙蒸水稀釋?zhuān)鬉值太低,則參加適量試劑三。(通常在25倍擺布稀釋?zhuān)?/p> 試劑四:液體50ml×2瓶,4℃保留6個(gè)月。 說(shuō)明書(shū): (1)檢查的成果沒(méi)有吸光度值或吸光度值很低
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