10086 v.A
細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途
磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B）細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑是一種旨在通過使用蛋白結(jié)合性紅色染料，即比色法定量測定細(xì)胞內(nèi)總蛋白質(zhì)合成率，以評價活體細(xì)胞繁殖的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種藥物、化學(xué)、環(huán)境因子和營養(yǎng)因子處理的貼壁生長中的動物或人體細(xì)胞。替代傳統(tǒng)的同位素[3H]-thymidine檢測的佳選擇。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，簡捷敏感，性能穩(wěn)定，顯色清晰。
技術(shù)背景
作為蛋白質(zhì)染色劑之一的磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B），又稱酸性紅52（Acid Red 52），是一種陰離子染料，與蛋白質(zhì)靜電（electrostate）結(jié)合，在540nm波長下產(chǎn)生吸收峰：吸光值與細(xì)胞量成線性正相關(guān)。
產(chǎn)品內(nèi)容
固著液（Reagent A） 毫升
清理液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 毫升
酸性液（Reagent D） 毫升
溶解液（Reagent E） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在室溫下，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
*細(xì)胞培養(yǎng)液：用于懸浮細(xì)胞的混勻
15毫升錐形離心管：用于懸浮細(xì)胞操作的容器
比色皿：用于細(xì)胞染色比色的容器
臺式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞
平式搖蕩儀：用于混勻染料
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于定量檢測染色后的細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 貼壁細(xì)胞檢測
1． 準(zhǔn)備96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測細(xì)胞 
2． 到規(guī)定的檢測時間點(diǎn)，從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板
3． 小心加入50微升預(yù)冷的固著液（Reagent A）到含有200微升細(xì)胞培養(yǎng)液的96孔板中每一個孔里（注意：每孔中的培養(yǎng)液需200微升）
4． 放進(jìn)4℃冰箱里，孵育1小時
5． 小心抽去含有固著液（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
6． 小心加入xx微升清理液（Reagent B）
7． 小心抽去清理液
8． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟6至7二次
9． 小心加入xx微升染色液（Reagent C）
10．室溫下孵育30分鐘，避免光照
11．小心抽去染色液
12．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
13．快速抽去酸性液（注意：參見注意事項(xiàng)8）
14．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12至13一次（注意：確保培養(yǎng)孔中無任何液體殘留；注意事項(xiàng)6）
15．加入xx微升溶解液（Reagent E）
16．置放在平式搖蕩儀上，室溫下孵育5分鐘，速度為50RPM，避免光照
17．即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測讀：波長540nm，參考波長690nm
18．實(shí)際吸光讀數(shù)＝OD540－OD600
19．繪制細(xì)胞生長曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（A）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)或時間點(diǎn)或藥物濃度
二、 懸浮細(xì)胞檢測
1． 準(zhǔn)備待測的懸浮細(xì)胞
2． 到規(guī)定的檢測時間點(diǎn)，轉(zhuǎn)移到15毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
4． 小心抽去上清液
5． 加入200微升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
6． 小心加入50微升預(yù)冷的固著液（Reagent A），混勻
7． 放進(jìn)4℃冰箱里，孵育1小時
8． 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
9． 小心抽去含有固著液（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
10．小心加入xx微升清理液（Reagent B），混勻
11．放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
12．小心抽去清理液
13．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟10至12二次
14．小心加入xx微升染色液（Reagent C），混勻
15．室溫下孵育30分鐘，避免光照
16．放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
17．小心抽去染色液
18．小心加入xx微升酸性液（Reagent D）
19．放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
20．小心抽去酸性液
21．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟18至20一次（注意：確保無任何液體殘留） 2
22．加入xx微升溶解液（Reagent E），混勻
23．平放在平式搖蕩儀上，室溫下孵育5分鐘，速度為50RPM，避免光照
24．即刻轉(zhuǎn)移到比色皿
25．放進(jìn)分光光度儀儀里測讀：波長540nm，參考波長690nm
26．實(shí)際吸光讀數(shù)＝OD540－OD600
27．繪制細(xì)胞生長曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實(shí)際吸光讀數(shù)（A）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)或時間點(diǎn)或藥物濃度
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為100次操作
2． 操作時須戴手套
3． 整個操作須無菌操作
4． 如果染色液（Reagent C）出現(xiàn)沉淀，建議過濾后，再使用
5． 建議檢測96孔板里的細(xì)胞量小于106
6． 建議使用有培養(yǎng)液但無細(xì)胞作為背景空對照：樣品讀數(shù)－背景空對照讀數(shù)
7． 每孔中的培養(yǎng)液需200微升，注意周邊培養(yǎng)孔的液體蒸發(fā)
8． 孵育時，須避光
9． 使用酸性液（Reagent D），需快速進(jìn)行，以免染料漏出胞外
10．細(xì)胞濃度過高，可以使用波長490至530nm
11．如果用戶沒有匹配的波長，可以使用波長490nm至560nm之間的任一波長替代
12．本公司提供系列細(xì)胞繁殖檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰