主要用途

組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙?；痯53多肽底物，經(jīng)過(guò)SIRT1脫乙?；螅晃稽c(diǎn)特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對(duì)硝基苯胺，即采用比色法來(lái)測(cè)定組織裂解萃取樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、核蛋白樣品、部分或*純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè)，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

人體組蛋白脫乙?；福╤istone deacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個(gè)蛋白：種類I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細(xì)胞核中；種類II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。種類III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙?；福╨ysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙?；磻?yīng)，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi)，與酵母Sir2同源性高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和抑制細(xì)胞凋亡?；谌斯ず铣傻囊阴；痯53（379至382氨基酸位點(diǎn)）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用比色染料對(duì)硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）來(lái)標(biāo)記乙?；痯53多肽底物，其次進(jìn)行脫乙酰化，后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對(duì)硝基苯胺（波長(zhǎng)405nm），由此來(lái)定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。

用戶自備

磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：用于清洗組織樣品
15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于組織細(xì)胞預(yù)處理
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)物孵育
96孔板或100微升1厘米光徑比色皿：用于反應(yīng)和比色的容器
酶標(biāo)儀或分光光度儀：用于比色分析

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為20次操作，包括背景對(duì)照
2．操作時(shí)，須戴手套
3．系統(tǒng)操作過(guò)程中，背景測(cè)定只需1次
4．樣品須澄清，至關(guān)重要 
5．樣品處理時(shí)，避免使用蛋白酶抑制劑、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等
6．孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測(cè)定
7．濾波器可以使用波長(zhǎng)400nm替代405nm
8．測(cè)定值由低到高變化；酶動(dòng)法測(cè)定可以持續(xù)60分鐘
9．測(cè)定值吸光讀數(shù)越高，表明酶活性越高
10．比色測(cè)定后，比色皿須清洗*
11．待測(cè)樣本為核蛋白樣品，其蛋白濃度為50微克/20微升；待測(cè)樣本為組織裂解懸液，其蛋白濃度為200微克/20微升（本公司提供  Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1） 
12．如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度
13．沉默調(diào)節(jié)蛋白1單位活性定義為：在30℃，pH 8.0條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾對(duì)硝基苯酚所需的酶量作為一個(gè)活性單位
14．本公司提供系列組蛋白脫乙?；笝z測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感